المستخلص
جمعت (220) عينة سريرية من مرضى يعانون من أمراض سريرية مختلفة ممن راجعوا مستشفى بعقوبة العام ومختبر الصحة العامة ومستشفى البتول للأطفال في محافظة ديالى خلال الفترة من تشرين الثاني 2022 إلى آذار 2023. جمعت العينات السريرية من الجروح والحروق والادرار والقدم السكري والخراج والبلغم وأذن المرضى.
هدفت الدراسة الحالية إلى تحضير وتوصيف مستخلص النيم (NeE) الذي يمتلك تركيبة كيميائية فعالة حيويا محمل على ناقلات دهون ذات بنية نانوية للكيتوسان (CS-NLCs) كجسيمات نانوية تخليقية خضراء لتعزيز خصائصه المضادة للميكروبات وفعاليتها. أيضا تقييم فعاليته في المختبر كمثبطات محتملة لمضخات التدفق (EPIs) ومضاد للاغشية الحيوية ضد الزائفة الزنجارية Pseudomonas aeruginosa المقاومة للأدوية المتعددة والمعزولة من مصادر سريرية.
أعطت 50 عينة نتائج إيجابية كعزلات P. aeruginosa مفترضة (22.7٪) عند زراعتها باستخدام أكار الدم ، و أكار MacConkey ، و أكار Pseudomonas ، و أكار Cetrimide ، ثم حددت عن طريق الفحص العياني والمجهري مع الاختبارات الكيميائية الحيوية والتأكيد بواسطة جهاز Vitek -2.
أجري اختبار الحساسية للمضادات الحيوية (AST) Antibiotics susceptibility test باستخدام طريقة الانتشار القرصي كيربي باور ضد 10 أقراص مضادات حيوية (Ceftazidime ، Cefotaxim ، Amikacin ، Pipracilin ، Levofloxacin ، Gentamicin ، Oflaxacin ، Imipenem ، Ciprofloxacin and Meropenem). أظهرت النتائج أن عزلات MDR و XDR و PDR P. aeruginosa وصلت إلى 25 (50٪) و 7 (14٪) و 3 (6٪) على التوالي ، علاوة على ذلك ، اظهرت مقاومة عالية ضد المضادات الحيوية Beta lactam(Ceftazidime و Cefotaxim وصلت إلى 48 (96٪) و 43 (86٪) على التوالي ، وPenicillin } Pipracilin 40(80٪) كمقاومة وحساسية متوسطة{ ، Aminoglycosides Amikacin} 34 (68٪){ Fluoroquinolones } Levofloxacin 28 (56٪){. بينما سجل MDS 15 (30٪) حساسية Imipenem , Ciprofloxacin وصلت إلى 36 (72٪) لكل منهما ، بينما Oflaxacin 35 (70٪).
اظهر اختبار إنتاج الأغشية الحيوية بطريقة صفيحة المعيار الدقيق أن جميع عزلات aeruginosa P. 3 (100٪) كانت منتجة قوية للأغشية الحيوية وأن عزلات P. aeruginosa XDR كانت 2 (28.6٪) قوية و 5 (71.4٪) متوسطة.
اظهرت نتائج الكشف عن جينات مضخات التدفق (EPs) بواسطة تقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل الأحادي والمتعدد أن جميع عزلات P. aeruginosa PDR و XDR تحتوي على ما لا يقل عن اثنان إلى أربعة جينات EPs . اكتشف MexC و MexY في كل منهم 10 (100٪) ، يليه جين Mex-B في نصفهم 5 (50٪) ، ثم MexX 2 (20٪) وOprM 1 (10٪) بينما لم يكتشف MexA في جميع هذه العزلات.
تم إجراء الفحص النوعي والكمي للمواد الكيميائية النباتية في مستخلصات كحول أوراق النيم (NeE) لتقييم وجود مكونات فعالة حيويا ، كشفت النتائج الخاصة ب Terpenoids والليمونين والفينولات والفلافونويد وغيرها. فضلا عن تحضير زيت ثمار النيم لاستخدامه في عملية التركيب النانوي
طورت جسيمات الكيتوسان النانوية (CSNPs) وناقلات الدهون ذات البنية النانوية (NLCs) لتحضير NeE-CSNLCs ووصفت بمقياس الطيف الضوئي للامتصاص المرئي للأشعة فوق البنفسجية ، ومطياف فوريير لتحويلات الأشعة تحت الحمراء (FTIR) ، تحليل المجهر الإلكتروني الماسح (SEM) ، الأشعة السينية المشتتة للطاقة (EDX) وحيود الأشعة السينية (XRD). كانت النتائج بين قيم NeE و CS و NeE-CSNLCs مختلفة وأثبتت نجاح تحضير NeE-CSNLCs بامتلاكه مظهر كروي بقطر يتراوح (44.58-73.05) نانومتر وشكل متجانس نسبيا.
تم تقييم النشاط المضاد للبكتيريا لـ NeE و NeE-CSNLCs باستخدام تحليل الحد الأدنى من التركيز المثبط (MIC) وتحت MIC بواسطة طريقة لوحة المعايرة الدقيقة في وجود صبغة resazurin ضد اربعة عزلات XDR وPDR P.aeruginosa منتجة بقوة ومتوسطة للأغشية الحيوية. اذ كان MIC لكل من NeE وNeE-CSNLCs ( 250 إلى 125) ميكروغرام / مل و (18.75 إلى 9.3) ميكروغرام / مل ، على التوالي. وظهر فرقا كبيرا مهم احصائيا (P≤0.01) بينهما.
اجري تقييم NeE-CSNLCs المحضر كمثبط قوي لجينات مضخات التدفق EPIs ضد عزلتين (ألاولى PDR P. aeruginosa منتجة قوية للغشاء الحيوي والثانية XDR P. aeruginosa منتجة متوسطة للغشاء الحيوي) التي كل منهما تحتوي على اربعة جينات EPs ، من خلال تقييم مستوى التعبير الجيني بواسطة تقنية qRT PCR. أظهرت النتائج كفاءة NeE-CSNLCs على أنها EPIs عالية لكل من MexC و OprM ، كما أن لها فرقا كبيرا مهم احصائيا (P≤0.01) مقارنة مع NeE و CS لوحدهما .
