المستخلص
شملت الدراسة جمع 114 عينة تضمنت 36 عينة حروق (Burns) و78 عينة جروح (Wounds) من المرضى الراقدين في مستشفى بعقوبة التعليمي خلال المدة من 19/9/2022 إلى 12/12/2022، وزرعت العينات على الأوساط اكار الماكونكي MacConkey agar واكار الدم agar Blood ولتأكيد التشخيص تم تنميت العزلات على وسط اكار السترمايد Cetrimide agar الخاص بهذه البكتريا وهو وسط انتخابي Selective.
تم التشخيص بالاعتماد على الصفات المظهرية Morphological Characteristic والتشخيص المجهري Microscopical identification والاختبارات الكيموحيوية Biochemical Test، وبينت النتائج إنّ 12 عينة بنسبة (%10.52) لم تظهر نمواً على الأوساط بينما 102 عينة بنسبة (%89.47) أظهرت نمواً ايجابياً إذ شملت 32 عينة حروق بنسبة (%31) و70 عينة جروح بنسبة (%69).
تم استخدام جهاز الفايتك Vitek2 لغرض التشخيص النهائي بدقة تصل إلى (%99) للتأكد من أنّ العزلات تابعة لبكتريا Pseudomonas aeruginosa، إذ بينت النتائج إن 43 عزلة وبنسبة (%42.16) كانت تابعة لبكتريا P. aeruginosa، بينما 59 عزلة وبنسبة (%57.84) كانت تعود إلى أنواع بكتيرية أخرى.
أظهرت نتائج اختبار الحساسية التي أجريت باستخدام طريقة انتشار الأقراص Kirby-Bauer تجاه 12 مضاداً حيوياً وقورنت النتائج حسب ما جاء في (CLSI ,2021) وكانت نسبة المقاومة كالتالي: Amoxicillin بنسبة %96، Ceftazidime بنسبة 100%، Cefotaxime بنسبة 100%، Ceftriaxone بنسبة 100%، Cefepime بنسبة %75، Meropenem بنسبة %76، Amikacin بنسبة %82، Tobramycin بنسبة %76، Gentamicin بنسبة %70، Erythromycin بنسبة %94، Polymyxin B بنسبة %23 وCiprofloxacin بنسبة %47.
تم التحري عن بعض عوامل الضراوة Virulence Factors فكانت قابلية عزلات بكتريا P. aeruginosa على إنتاج إنزيم البروتيز Protease هي قدرة 14 عزلة وبنسبة (82.35%) على إنتاج إنزيم البروتيز Protease، بينما 3 عزلات وبنسبة (17.65%) غير قادرة على إنتاجه. أما بالنسبة لإنتاج إنزيم الجيلاتينيز فقد أظهرت 7 عزلات من بكتريا P. aeruginosa وبنسبة (41.18%) قابليتها على إنتاج إنزيم الجيلاتينيز في حين كانت 10 عزلات وبنسبة (58.82 %) غير قادرة على إنتاجه. أما بالنسبة لقابلية عزلات بكتريا P. aeruginosa على إنتاج الأغشية الحيوية وذلكباستعمال طريقة أطباق المعايرة الدقيقة Micro-titer plate method (MTP)، فقدأظهرت النتائج إن 7 عزلات وبنسبة (41%) كانت قوية التكوين للغشاء الحيوي، بينما 4 عزلات وبنسبة (23%) متوسطة التكوين، بينما 6 عزلات وبنسبة (35%) ضعيفة التكوين للغشاء الحيوي.
تم التحري عن أربعة جينات في 17 عزلة تابعة لبكتريا P. aeruginosa باستخدام تقنية تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR) Polymerase Chain Reaction وباستعمال بوادئ متخصصة وهذه الجينات هي (lasI، rhlR، pslA، pslD) فاكنت نسبة وجودها كالتالي: وجود الجين lasI بنسبة (100%)، أما الجين rhlR فوجد بنسبة (100%)، كذلك الجين pslA فقد وجد بنسبة (100%)، في حين أن الجين pslD وجد بنسبة (94%).
تم اجراء التحليل التتابعي DNA Sequencing ل 10 عزلات تابعة لبكتريا P. aeruginosa حاملة للجين lasI بحجم 607 زوج قاعدي، تمت مقارنة هذه العزلات مع بنك الجينات (NCBI)، وبينت النتائج إن العزلتين رقم (2) و(5) كانت متطابقة مع تلك الموجودة في بنك الجينات بنسبة 100%، بينما العزلات الثمان الأخرى أظهرت نسب تطابق مختلفة نتيجة ظهور الطفرات فيها تباينت ما بين طفرات تحول Transversion وانتقال Transion وإضافة Addition وحذف Deletion، وتم تسجيل إحدى طفرات العزلة رقم (10) في بنك الجينات (NCBI) تحت الرقم التسلسلي (LC767910).
تم بناء الشجرة الوراثية Phylogenetic Tree ل 10 عزلات محلية تابعة لبكتريا P. aeruginosa فكانت نتائج الشجرة إنّ المسافة الوراثية بين العزلة 1 والعزلة 2 هي 0، بينما المسافة بين العزلة 7 والعزلات 3، 6، 8، 5، 10، 4، 9 0.00004-، والمسافة بين العزلات 3، 6، 8، 5، 10 والعزلتين 4 و9 هي 0.00001، وإنّ المسافة بين العزلات 3، 6، 8 والعزلتين 5، 10 هي 0.00254، والمسافة بين العزلتين 3، 6 والعزلة 8 هي 0.00001، والمسافة بين العزلة 3 والعزلة 6 هي 0.00254، والمسافة بين العزلة 5 والعزلة 10 هي 0.00001، كذلك المسافة بين العزلة 4 والعزلة 9 هي 0.00001.
