المستخلص
تم جمع (238) عينة سريرية من المرضى (المراجعين والراقدين ), تضمنت عينات من (حروق البراز – البول) من الذكور والإناث ومسحات مهبلية من نساء متزوجات ، بفئات عمرية مختلفة ، خلال فترة الدراسة التي بدأت من ايلول / 2020 وانتهت في شباط / 2021. في المستشفيات الحكومية في بعقوبة / ديالى من اصل 238 عينة ، أعطت (18.9% )45 عزلة نتيجة إيجابية لعزلات Candida albicans وزعت في(16, 11 ,13 ,5)عزلة من مسحات المهبل والبراز والبول والحرق على التوالي .
. تم التحقق من مقاومة وحساسية عزلات C. albicans لـ (5) مضادات فطريات من مجاميع مختلفة بوساطة طريقة Kirby-Bauer القياسية للانتشار القرصي. اوضحت النتائج بان نسبة المقاومة من قبل خميرة C. albicans لمضادات الفطريات المختلفة. كانت (91٪) إلى Metroconazol (MZ) ، 87)٪) إلى Fluconazol (FLU) ، (69٪ ( إلى Ketoconazol (KCT) ، بينما اشارة النتائج الى انخفاض كبير في مقاومتها للأمفوتريسينB (27%) و (44.4٪) إلى Caspfungin (CAS). ، كما بينت النتائج منC. albicans أن العزلات كانت 25 (55.6٪) حساسة للأدوية المتعددة (multi drug sensitive ) ، و20 (44.4٪)(multi drug resistance) متعددة المقاومة للمضادات.
تم التحري عن عوامل الضراوة مظهريا من خلال تجارب تكوين الأغشية الحيوية Biofilm formation ، والنشاط الانحلالي ، وانتاج انزيمي Protase و Phospholipase ،ففي تجربة تكوين الغشاء الحيوي أظهرت النتائج ان C. albicans منتجة للغشاء الحيوي ،كانت 15/32 (46.9٪) ضعيفة الانتاج للغشاء الحيوي و32/15 (46.9%) متوسطة و2/32 (6.3%)عالية الانتاج للغشاء الحيوي. كذلك بينت النتائج ان العزلات المهبلية هي الأعلى من بين العينات الأخرى في انتاجها للغشاء الحيوي ، وأظهرت نتيجة تجربة التحلل الدموي أن جميع العزلات أعطت تحلل دموي نوع ألفا. بينما اشارت نتائج تجربة انتاج انزيم Phospholipase أن جميع العزلات ظهرت منطقة مترسبة حول المستعمرة Candida albicans ، 27وبنسبة (84.4٪) من اصل 32 عزلة C. albicans أظهرت قدرة انتاج عالية لانزيم Phospholipase بينما 5 وبنسبة (15.6٪) كانت ضعيفة. في تجربة انتاج انزيم Protase اظهرت النتائج قدرة خمير C. albicans. على انتاج انزيم Protase و من اصل 32 عزلة C. albicans ، كانت 20وبنسبة (62.5٪) عالية الانتاج لانزيم Protase , و6 /32 بنسبة (18.8%) ضعيفة الانتاج لانزيم Protase . بينما كانت 6وبنسبة (18.8٪) غير منتجة لانزيم Protase ،
تم الحصول على 180 مل من بروتين المثبط للرايبوسوم بتركيز 9.8 ملغم / مل من مستخلص 180 غرام من الكمأ المجفف . اظهرت نتائج التركيز المثبط الادنى (MIC) لمضاد fluconazol وللبروتينات الريبوزومية المثبطة (ribosomal inactivating proteins) كان تركيز MIC ل (fluconazol) 64ميكروغرام / مل بينما تركيز (MIC) ل (ribosomal inactivating proteins )كان بين (325-5200 ميكروغرام ( ml\ على عزلات C. albicans. .
تم الكشف عن جينات ALS1 و ALS3 و SAP5 و PLB1 و CDR2 و ERG11 بتقنية PCR ل 20 عزلة C. albicans. ذات المقاومة المتعددة للمضادات الفطرية حيث أظهرت نتائج الفصل الكهربائي للهلام لمنتج PCR باستخدام بادئات متخصصة لهذه الجينات أن 19 /20(95٪) من العزلات كانت موجبة لجين ALS1 ، و 18/20 (90٪) من العزلات كانت موجبة لـ ALS3gene ، كما أعطى الجين SAP5 نفس نتيجة جين ALS3 ، في حين أن 20/20 (100٪) من العزلات كانت موجبة لجين CDR2 بينما لم تظهر أي عزلة من العزلات العشرين من C. albicans. قيد الدراسة إيجابية لجين ERG11. تم تطبيق تفاعل البلمرة المتسلسل الكمي للنسخ العكسي (RT-qPCR) لتحديد التعبير الجيني للجينين gene expression CDR2 و ALS3 قبل و بعد المعالجة و لعزلتين من( C. albicans) مرة بالمضاد fluconazol و ribosomal inactivating proteins مرة أخرى ، أظهر جين CDR2 مستوى أقل من الطي بمتوسط 0.1 بعد العلاج بـ fluconazol في العزلات ، في حين ان جين CDR2 أظهر مستوى أقل من الطي بمتوسط 0.6 عند معالجته بـ ribosomal inactivating proteins أكثر من معاملته بـ fluconazol ،اما بالنسبة إلى جين ALS3 ، فقد أظهر مستوى أقل من الطي بمتوسط 0.3 بعد معالجته بـ fluconazol ولكنه أظهر مستوى أقل من الطي بمتوسط 0.1 عند معالجته بـ ribosomal inactivating proteins أقل من معالجته بـ fluconazol.
أشارت تفاعلات التسلسل التي تم إجراؤها إلى أن الهوية الدقيقة للعينات التي تم فحصها كانت C. albicans. فيما يتعلق بجين ALS3 الذي تم فحصه ، أظهرت نتائج التسلسل عدم وجود متغيرات الحمض النووي في جميع العينات الثلاثة التي تم فحصها. تم الاستدلال من الشجرة التطورية على أن العينات التي تم فحصها كانت مناسبة بالقرب من سلالات مختلفة من C. albicans المودعة من مصادر أمريكية وأوروبية وآسيوية. نظرًا لغياب التباين الجيني ، تم التوصل الى ان كلتا العينتين التي تم فحصها في وضع تطوري واحد, وفيما يتعلق بجين CDR2 الذي تم فحصه ، أظهرت تفاعلات التسلسل وجود خمسة متغيرات للحمض النووي في العينة التي تم فحصها ، وهي: 145C> T ، 155G> C ، 161A> T ، 166T> C ، و 388A> G. أظهرت ترجمة هذه التسلسلات إلى بقايا الأحماض الأمينية النمط الصامت لثلاثة من هذه المتغيرات (p.942Asp = ، p.948Thr = ، و p.1023Leu =) ، والآثار الخاطئة لاثنين منها (p.946Glu> Gln و ص 948> Ser.). تم الاستدلال من الشجرة التطورية على أن هذه العينة كانت مناسبة في المنطقة مختلفة لسلالات مختلفة من C. albicansالمودعة من عدة مصادر أمريكية لاتينية وأوروبية وآسيوية. استنادًا إلى الأشجار المشيدة حاليًا ، أشارت أنماط مسافات النشوء والتطور المجاورة في الشجرة التطورية القائمة على الجينات CDR2 إلى تنوع بيولوجي أوسع وتوزيع أكثر تحديدًا لتسلسلات Candida albicans على التسلسلات المستندة إلى الجينات ALS3. وجدت هذه الدراسة قدرة تمثيلية أعلى لـ CDR2 لاكتشاف التسلسلات التي تم تحليلها حاليًا من C. albicans على تسلسلات ALS3 في العينات التي تم فحصها.
