المستخلص
تعد عدوى المسالك البولية (UTI) واحدة من أكثر أنواع العدوى البكتيرية شيوعا التي تؤثر على كل من المرضى في المستشفى والمرضى المكتسبين من المجتمع. الكلبسيلة الالتهاب الرئوي هي بكتيريا سالبة الجرام ومغلفة وعلى شكل قضيب ، هي واحدة من الأسباب الرئيسية لعدوى المسالك البولية ، خاصة لدى الأفراد الذين يعانون من نقص المناعة. تكوين الأغشية الحيوية هو سمة مميزة لهذا الكائن الحي. اكتساب مقاومة متعددة الأدوية ، واستخدم آليات مقاومة متعددة ، من بينها الإفراط في التعبير عن مضخات التدفق ، المسؤولة عن الطرد النشط للمضادات الحيوية من الخلية البكتيرية.
تحتل الطريقة البيولوجية لتخليق الجسيمات النانوية مجالا مهما بسبب الفوائد الاقتصادية والصديقة للبيئة عند مقارنتها بطرق التخليق الفيزيائي والكيميائي. لذلك ، هدفت هذه الدراسة إلى تحضير جزيئات السيلينيوم النانوية (SeNPs) من خلال الطريقة البيولوجية من سلالة Bacillus subtilis وتقييم تأثير SeNPs على التعبير عن جينات مضخة التدفق في K. الالتهاب الرئوي المعزول من مرضى المسالك البولية. تم جمع ما مجموعه 204 عينات بول من مرضى في محافظة بغداد، وتحديدا من مستشفى غازي الحريري والمختبرات التعليمية في المدينة الطبية خلال الفترة من سبتمبر 2024 إلى ديسمبر 2024. من بين هؤلاء ، تم تحديد 34 عزلة على أنها K. pneumoniae باستخدام الطرق الزراعية القياسية والاختبارات الكيميائية الحيوية والتحديد الآلي بواسطة نظام VITEK 2.
كانت نتائج مقاومة المضادات الحيوية على النحو التالي: مقاومة سيفوتاكسيم (76٪) ، سيفترياكسون (68٪) ، تريميثوبريم (68٪) ، بيبيراسيلين (68٪) ، أموكسيسيلين – كلافولانات (65٪) ، بيبيراسيلين – تازوباكتام (53٪) ، جنتامايسين (50%), سيفالوسبورين (سيفتازيديم و سيفيبيم) (47٪) ، أزتريونام (47٪) ، ميروبينيم (41٪) ، أميكاسين (35٪) ، سيبروفلوكساسين (35٪) ، إيميبينيم (29٪) ، ليفوفلوكساسين (15٪) و
كلورامفينيكول (0٪). أظهر اختبار الحساسية للمضادات الحيوية لعزلات Klebsiella pneumoniae أن 8 (23.5٪) و 10 (29.4٪) و 16 (47.1٪) كانت حساسة للأدوية المتعددة (MDS) ومقاومة الأدوية الممتدة (XDR) ومقاومة الأدوية المتعددة (MDR) ، على التوالي. الكشف عن التنميط الظاهري للأغشية الحيوية باستخدام لوحة العيار الدقيق في K.يظهر الالتهاب الرئوي ضعف الإنتاج عند 3 (8.8٪) ، والإنتاج المعتدل عند 14 (41.2٪) ، بينما كان الإنتاج القوي عند 17 (50٪).
باستخدام تقنية عجلة بروميد أجار الإيثيديوم (EtBr CW) ، وجدنا أن 20 عزلة من K. كان للالتهاب الرئوي مضخات تدفق مستمر. استخدمنا صبغة بروميد الإيثيديوم بتركيزات متفاوتة تبلغ 1 و 1.5 و 2 و 2,5 مجم / لتر لمساعدتنا في تحديد الأنماط الظاهرية. أشارت النتائج إلى أن كل K. كانت عزلات الالتهاب الرئوي إيجابية لتحديد النمط الظاهري. تم إجراء الكشف الجزيئي على 20 عزلة (10 MDR و 10 XDR) من أصل 34 عزلة لتحديد وجود الجينات المرتبطة بمضخة الجريان. الكل 20 ك. كانت عزلات الالتهاب الرئوي (100٪) إيجابية للجينات التالية: acrA و acrB و oqxA و oqxB و ramA و rpoB ، مما يؤكد إمكاناتها الجينية القوية لمقاومة المضادات الحيوية.
تم تصنيع جزيئات السيلينيوم النانوية بطريقة بيولوجية وصديقة للبيئة باستخدام المادة الطافية لمزارع Bacillus subtilis . نتج عن نهج التوليف الأخضر هذا لون برتقالي محمر ملحوظ ، مما يشير إلى تكوين الجسيمات النانوية. تم عرض ذروة الامتصاص عند 257 نانومتر من خلال تقييم الجسيمات النانوية باستخدام التحليل الطيفي المرئي للأشعة فوق البنفسجية ، وتم استخدام XRD و FTIR وتقنيات التصوير الأخرى لتقريب النتائج ، والتقييمات المورفولوجية التي أجريت باستخدام SEM و TEM ، أو الفحص المجهري الإلكتروني للإرسال. الجسيمات النانوية كروية في المقام الأول ، متعددة التشتت ، ويبلغ متوسط قطرها حوالي 82 نانومتر ، وفقا لملاحظة TEM ، بينما تشهد صور SEM أيضا على أن الجسيمات النانوية لها أبعاد في النطاق النانومتري ، من حوالي 29 إلى 73 نانومتر.
تم استخدام طريقة نشر بئر أجار من أجل تقييم فعالية خصائصها المضادة للبكتيريا. بالإضافة إلى ذلك ، فإن أصغر تركيز يمنع فيه SeNps انتشار K المعزول. تم تحديد الالتهاب الرئوي باستخدام طريقة تخفيف المرق في صفيحة ميكروتيتر. تضمنت هذه الطريقة إجراء تخفيفات تسلسلية ل SeNps بتركيزات من Focus 2000 ، 1000 ، 500 ، 250 ، 125 ، 62.5 ، 31.25 ، 15.6 ، 7.8 ميكروغرام / مل ضد البكتيريا.
علاوة على ذلك ، تم استخراج إجمالي الحمض النووي الريبي من ستة (6) من (20) من معزلات K. pneumoniae ، سواء الخلايا البكتيرية المعالجة أو غير المعالجة لفحص تأثير SeNPs على التعبير الجيني. جينات مضخة التفريغ الهامة ، تم استخدام طريقة RT-PCR الكمية (qRT-PCR) لتحليل العينة ، والتي تضمنت acrA و oqxA. كشفت النتائج أن SeNPs لم تمنع نمو البوتاسيوم فقط. الالتهاب الرئوي بالإضافة إلى انخفاض كبير في التعبير الجيني لمضخة التدفق ، مما يشير إلى انعكاس محتمل لآليات المقاومة. كشف التعبير عن جين acrA عن تغيير الطية في التعبير (التنظيم السفلي) بمتوسط 0.49 وبالنسبة لجين oqxA بمتوسط تغيير الطية 0.33 بعد العلاج باستخدام SeNPs.
في الختام ، أظهرت جزيئات السيلينيوم النانوية التي تم تصنيعها بيولوجيا بواسطة Bacillus subtilis نشاطا قويا مضادا للبكتيريا وقللت من التعبير عن جينات مضخة التدفق في K. الالتهاب الرئوي المعزول. تشير قدرتها على استهداف آليات المقاومة إلى إمكاناتها كاستراتيجية داعمة ضد العدوى المقاومة للأدوية المتعددة.
