المستخلص
تم جمع (250) عينة سريرية من مصادر مختلفة (الادرار، الحروق، الجروح، القدم السكرية، المسحات المهبلية) من المرضى المصابين بالتهابات مختلفة من مستشفى بعقوبة التعليمي، مستشفى البتول التعليمي، ومستشفى الخالص في محافظة ديالى خلال الفترة من آب 2023 إلى كانون الثاني 2024 ليتم عزلها وتحديدها والتأكد من وجود بكتيريا Proteus mirabilis فيها.
أظهرت النتائج أن 75 (30%) من العزلات كانت من نوع P. mirabilis موزعة حسب المصادر من الأعلى إلى الأقل بالأرقام والنسب كما يلي: الادرار، المسحات المهبلية، الحروق، القدم السكرية، والجروح: 35 (46.7%) ، 12 (16٪) ، 10 (13.3٪)، 10 (13.3٪) و 8 (10.7٪) على التوالي اعتمادا على الطرق التقليدية باستخدام الاوساط التفريقية الخاصة و الخصائص المجهرية و الاختبارات الكيموحيوية, حيث أظهرت جميع عزلات P. mirabilis نتائج إيجابية لكل من فحص الانثيال، KIA، الكاتليز، الميثيل الأحمر والسيترات، في حين أظهرت نتائج سلبية لإنزيم الإندول والأوكسيديز.
تم فحص خمسة وسبعين عزلة من P. mirabilis للكشف عن المقاومة المتعددة والواسعة النطاق للأدوية ضد 15 مضاد حيوي، وقد وجد أن المضاد الحيوي الأكثر فعالية ضد العزلات هو Norfloxacin 100% حيث كانت جميع العزلات حساسة له، يليه Levofloxacin 94.7% و Ofloxacin 87%. ومن ناحية أخرى، كان المضاد الحيوي الأقل فعالية هو Amikacin و Oxacillinحيث قاومتهما جميع العزلات بنسبة 100%، يليه Amoxicillin 97%. بالإضافة إلى ذلك، أظهرت هذه العزلات معدلات مقاومة متفاوتة Aztreonam 47%، Imipenem 17%، Cefoxitin 3%، Ceftazidime 60%، Ciprofloxacin 3%، Naldixic acid 33%، Gentamicin 50%، Kanamycin 63%، Amoxicilin-Clavulanic acid 27%. وقد وجد أن 73 (97%) من جميع العزلات كانت مقاومة للأدوية المتعددة MDR، في حين أن 2 عزلة فقط كانت تميل إلى أن تكون مقاومة للأدوية XDR (3%) بينما لم يتم الكشف عن أي مقاومة للأدوية الشاملة PDR.
أظهرت النتائج الحالية أن جميع عزلات P. mirabilis كانت إيجابية ظاهريا (100%) في انتاج انزيم اليورييز والأغشية الحيوية بدرجات مختلفة. كما أظهرت الدراسة أن (37%) و(73%) من عزلات P. mirabilis تنتج انزيمات البيتا لاكتام والـ ESβ لاكتام واسعة الطيف على التوالي.
فيما يتعلق بانتشار جينات المقاومة، كشفت النتائج التي توصلنا إليها أن العزلات الـ 12 المقاومة قد تم إخضاعها لتقنية تفاعل البلمرة المتسلسل بنمط Uniplex لتضخيم المقاومة المشفرة لهذه الجينات. لقد وجد أن معدل انتشار 16SrRNA، aac(6ʹ)-Ib، blaTEM، Intl1، Intl2 هو (100%)، (33.33%)، (25%)، (75%) و (50%) على التوالي. تم تحديد عزلة بكتيرية واحدة، P. mirabilis رقم (2) معزولة من عدوى القدم السكرية حيث تم إيداع السلالة القياسية في المركز الوطني لمعلومات التكنولوجيا الحيوية (NCBI) برقم الانضمام PP593933.1، LC810419.1، LC810416.1، LC810417.1، LC810418.1 للجينات 16SrRNA gene، blaTEM-1، aac(6ʹ)-Ib، IntI1، IntI2، على التوالي.
تم تضخيم إجمالي اثنتي عشرة عينة (تم تعيينها من A1 إلى A12) من موضع 16SrRNA. أظهرت الاختلافات في تسلسلات الرايبوسوم تشابهًا بنسبة 99٪ بين العينة المتسلسلة من A1 – A12 وتسلسلات الهدف المرجعية (GenBank acc. OL629230.1) وتم تضخيم إجمالي أربع عزلات (تم تعيينها من B1 إلى B4) من موضع IntI. حددت استجابات التسلسل الهوية الدقيقة بعد استخدام NCBI blastn لقطع PCR المضخمة. أظهر NCBI BLASTn تشابهًا بنسبة 100٪ بين العينة المتسلسلة من B1 – B4. تسلسلات الهدف المرجعية (GenBank acc. KP66515.1).
تم تضخيم إجمالي أربع عينات (تم تعيينها من C1 إلى C4) من موضع IntI1. أظهر محرك NCBI BLASTn تشابهًا بنسبة 99٪ بين العينة المتسلسلة من تسلسلات الهدف المرجعي C1 – C4 و P. mirabilis (GenBank acc. CP138492.1). كما تم تضخيم إجمالي أربع عينات (تم تعيينها من D1 إلى D4) من موضع aacIb. أظهر NCBI BLASTn تشابهًا بنسبة 99٪ بين العينة المتسلسلة من تسلسلات الهدف المرجعي C1 – C4 و P. mirabilis (GenBank acc. CP015347.1). وتم تضخيم إجمالي ثلاث عينات (تم تعيينها من E1 إلى E3) من موضع blaTEM. أظهر NCBI BLASTn تشابهًا بنسبة 100٪ بين العينة المتسلسلة من C1 – C4 وتسلسلات الهدف المرجعي (GenBank acc. CP148143.1).
تم إنشاء شجرة تطورية شاملة لعزلات P. mirabilis ذات المقاومة المتعددة MDR في الدراسة الحالية استنادًا إلى تسلسل الأحماض النووية داخل نواتج التضخيم لتفاعل البلمرة المتسلسل PCR لـ 16SrRNA و IntI1 و IntI2 و aacIb و blaTEM ومقارنة التسلسلات الجينية التي تم الحصول عليها من مصادر مختلفة، يتم الحصول على رؤى مختلفة حول تنوع السلالات وارتباطها. يسمح التحليل التطوري بتصنيف عزلات P. mirabilis إلى عدة مجموعات مميزة، والتي يمكن أن توفر معلومات حول انتشار وانتقال سلالات معينة.
