المستخلص
وخيارات العلاج البديلة ضد البكتيريا Streptococcus mutans المعزولة من مرضى تسوس الأسنان في محافظة ديالى (مستشفيات المقدادية العام و مستشفى الزهراء والمركز التخصصي لطب الاسنان في المقدادية) خلال الفترة من سبتمبر 2024 إلى مارس 2025. تم اخذ 200 عينة جميعها من اشخاص يعانون من تسوس الأسنان. شكلت الإناث الغالبية (57.0%) مقارنة بالذكور (43.0%)، مع فرق ذو دلالة إحصائية (p<0.05). فيما يتعلق بتوزيع الأعمار، كانت أعلى نسبة انتشار لتسوس الأسنان في الفئات العمرية من 11 إلى 20 عامًا (23.5%) و21 إلى 30 عامًا (19%)، في حين كانت أقل نسبة انتشار في الفئات العمرية من 5 إلى 10، ومن 51 إلى 60، و≥61 سنة (11% و7% و11% على التوالي) (p<0.05). كان معظم المرضى من المدخنين (80.0%)، في حين مثل الغير مدخنين 20.0% (p<0.001). كان تسوس الأسنان هو الحالة السريرية السائدة (92.0%)، تلاه مرض السكري (3.5%)، التهاب اللثة (2.5%)، وأمراض الجهاز التنفسي (2.0) (p<0.001) %
تم زراعة جميع العينات الفموية وعينات اللويحات السنية البالغ عددها 200 عينة. تم ملاحظة نمو بكتيري في 192 عينة (96.0%)، في حين أن 8 عينات فقط (4.0%) لم تُظهر نموًا، مع فرق ذو دلالة إحصائية عالية (p<0.001). من بين 192 عينة إيجابية، كانت Streptococcus mutans تمثل 15 عزلة (7.81%)، بينما تمثل أنواع Streptococcus الأخرى 44 عزلة (22.91%)، وأنواع بكتيرية أخرى 133 عزلة (69.27%) (p<0.001). كانت جميع الـ 15 عزلة سلبية لمتفاعلات الكاتلاز، ونمت جميع العزلات في 4% NaCl، ولكن لم تنمو في 6.5% NaCl، وكذلك جميع العزلات قامتFermenting المانيتول والسوربيتول والرايفينوز والسكروز، كما يظهر من تغير لون الوسط من الأحمر إلى الأصفر. كانت إيجابية Streptococcus mutans أعلى بين المدخنين (67%) مقارنة بغير المدخنين (33%) (p<0.05)، ومع respect للأمراض المرتبطة، تم العثور عليها بين المرضى الذين لديهم اضطرابات تنفسية (7%)، التهاب اللثة (7%)، ومرض السكري (13%)، مع ارتباطات ذات دلالة إحصائية (p<0.05–0.001).
تم تقييم تكوين الاغشية الحيوية باستخدام طريقة الصفيحة الصغيرة. من بين 15 عزلة، كان 13 (87%) مُنتجًا قويًا الاغشية و2 (13%) كانت مُنتجة معتدلة الاغشية ؛ لم يكن هناك أي منها ضعيف الإنتاج (p<0.001). تم اختبار 15 عزل S. mutans ضد 15 مضادًا حيويًا تنتمي إلى فئات مختلفة باستخدام طريقة انتشار الأقراص؛ تم ملاحظة معدلات عالية من المقاومة ضد: الميترونيدازول (100%)، الرفامبين (93.33%)، السيبروفلوكساسين (86.66%)، الجنتاميسين (73.33%)، التتراسيكلين (66.66%)، الإريثروميسين (53.33%)، الأموكسيسيلين (46.66%)، والبنسلين (26.66%). بينما لوحظت حساسية عالية تجاه: الميثيسيلين، الفانكوميسين، الذي أظهرا تأثيرًا مثبطًا تامًا (100%) (15/15). تم تصنيف جميع العزلات الـ 15 من س. S. mutans كعزلات متعددة المقاومة للأدوية (MDR) بنسبة 100%. وفقًا للمعايير القياسية، تشير قيمة MAR ≥0.2 إلى الأصل من بيئة عالية المخاطر حيث يتم استخدام المضادات الحيوية بشكل متكرر. وبالتالي، تعتبر 40% من العزلات (MAR = 0.27) عالية الخطورة بشكل خاص، بينما أيضًا 60% (0.20) فوق العتبة الحرجة، مما يشير إلى ضغط المضادات الحيوية المنتشر في المجتمع المدروس.
تم الكشف الجزيئي عن جينات الجلوكوزيل ترانسفيراز gtfB و gtfC و gtfD في 10 عزلات مختارة من S. mutans (تم اختيارها بناءً على قدرة تشكيل الاغشية الحيوية القوية (MDR). أظهرت النتائج أن 90% من العزلات المختبرة تحمل جميع الجينات الثلاث، التي تعتبر مركزية لإنتاج الجلوكوز، والالتصاق، وتكوين الاغشية على سطح الأسنان.
تم اختبار آثار الكيتوزان، نانو-كيتوزان، ومستخلص القرنفل ضد S. mutans. أظهرت النتائج أن خمسة عزلات ممثلة لمتعددة المقاومة (MDR) والمُنتجة القوية للبيوفيلم تم اختبارها ضد الكيتوزان، النانو-كيتوزان، ومستخلص القرنفل الكحولي باستخدام طريقة الانتشار في الحفر بتركيزات 50، 25، و12.5 ملغ /ml؛ أظهر النانو-كيتوزان أكبر مناطق تثبيط لجميع العزلات وفي جميع التركيزات المختبرة، متفوقًا على كل من الكيتوزان والقرنفل. عند 50 ملغ /ml، كانت مناطق التثبيط لـ S1 هي 34 مم (نانو-كيتوزان)، 27 مم (كيتوزان)، و26 مم (قرنفل)، مع أنماط متوافقة للعزلات الأخرى (S2-S5). أظهر مستخلص القرنفل أقل مناطق تثبيط بين الثلاثة عوامل، بينما أظهر النانو-كيتوزان أعلى (p<0.05)، مما يدل على نشاط مضاد باكتيري أكبر. تم اختبار قيم التركيز المثبط الأدنى (MIC) والتركيز القاتل الأدنى (MBC): كانت قيم MIC للنانو-كيتوزان أقل باستمرار من تلك الخاصة بالكيتوزان لكل العزلات (MIC للنانو-كيتوزان 0.156–0.320 /ml مقابل كيتوزان 0.512–0.850 /ml). كانت قيم MBC للنانو-كيتوزان (0.250–0.425 ملغ/ml) أيضًا أدنى بكثير من تلك الخاصة بالكيتوزان (1.25–1.56 ملغ/ml). تطلب مستخلص القرنفل تركيزات أعلى لـ MIC وMBC مقارنة بالنانو-كيتوزان. تم تقييم تأثير الكيتوزان، النانو-كيتوزان، ومستخلص القرنفل الكحولي على تكوين الاغشية؛ أظهرت العزلات غير المعالجة تكوين اغشية قوية (OD 0.098 to 0.182)، حيث قلل الكيتوزان تكوين الاغشية بمعدل تثبيط متوسط يبلغ 96.43%. أنتج النانو-كيتوزان معدل تثبيط متوسطًا قليلاً أعلى يبلغ 96.78%، مما يشير إلى تفوق طفيف ولكن متسق على الكيتوزان. أثبت مستخلص القرنفل الكحولي تثبيطًا لتكوين الاغشية بمعدل متوسط بلغ 93.25%، وهو أقل بقليل من كل من الكيتوزان والنانو-كيتوزان، لكنه لا يزال يمثل نشاطًا كبيرًا ضد البيوفيلم. تراوحت معدلات التثبيط للعزلات الفردية من حوالي 92.6% إلى 96.9%، مع ملاحظات ذات دلالة إحصائية (p<0.05) في العديد من الحالات، خاصة للكيتوزان والقرنفل. تم اختبار تأثير تآزري لمزيج من النانو-كيتوزان (0.2340 /ml) ومستخلص القرنفل (0.6592 /ml) ضد نفس خمسة عزلات S. mutans. أنتج المزيج تثبيطًا شبه كامل لتكوين الاغشية: تراوحت نسبة التثبيط من 99.64% إلى 99.78%، مع معدل تثبيط متوسط يبلغ 99.71%. .
