المستخلص
تضمنت الدراسة جمع 367 عينة براز المأخوذة من المرضى الراقدين في مستشفى البتول للنسائية والتوليد والأطفال والمختبرات الاهلية للفترة من 15/11/2022 ولغاية 1/2/2023 لفئات عمرية مختلفة تراوحت اعمارهم بين سن (اقل من سنة-7 سنة) من الذكور والاناث بواقع 207 عينة من الذكور و160 عينة من الاناث. اذ جرى فحص العينات مجهريا بالطريقة المباشرة وبطريقة التطويف لغرض تشخيص طفيلي Entamoeba histolytica. وباستخدام بادئ متخصص هو جين 18S rRNA وتم الحصول على 52 عينة وبنسبة 14.44% تعود لطفيلي Entamoeba histolytica . ولتشخيص بكتريا coli E. زرعت العينات على اطباق اكار الدم واكار الماكونكي بطريقة التخطيط، للتميز بين البكتريا الموجبة او السالبة لصبغة كرام ثم زرعت العينات على وسط ايوسين ازرق المثيلين لتشخيص عزلات coli E. التي تظهر بلون اخضر معدني لامع. تم الكشف عن بكتريا coli Escherichia بالاعتماد على الاختبارات الكيموحيوية وتأكيد تشخيصها جزيئيا باستخدام جين trpA اذ جرى تشخيص 50 عزلة بشكل دقيق ونهائي تعود الى بكتريا coli Escherichia.
وتم الكشف عن نظام استشعار النصاب quorum sensing في بكتريا coli E. من خلال الكشف عن اشارات (AHLs) بطريقة الفحص الكمي باستخدام جهاز الاليزا وكانت بنسبة 92%. اما الكشف الجزيئي عن جين sdiA الذي يعد مستقبلا يكتشف حصريًا إشارات (AHLs) كانت ظهور الجين بنسبة 98%.
أظهرت نتائج الكشف عن عوامل الضراوة، وجرى الكشف عن تكوين الأغشية الحيوية بالطريقة الكمية باستخدام جهاز الاليزا واظهرت النتائج ان العزلات جميعها كانت مكونة للغشاء الحيوي وكانت بنسبة 100%. 38 عزلة منها وبنسبة 76% قوية التكوين للغشاء الحيوي، و12 عزلة وبنسبة 24% متوسطة الشدة. اظهرت العزلات المنتجة لانزيم الهيمولايسين 32 عزلة وبنسبة 64%. بينت نتائج الكشف عن انتاج انزيمات البيتالاكتاميز واسعة الطيف كانت بنسبة 18%. اما إنتاج أنزيمات البيتالاكتاميز المعدنية فتبين ان 23 عزلة منتجة للانزيم وبنسبة 46%.
واظهرت نتائج اختبار حساسية بكتريا E. coli للمضادات الحياتية ( Ampicillin، Amoxicillin، clavulanate، Ceftazidime، Cefotaxime، Aztreonam ،Tobramycin Amikacin، Azithromycin، Doxycycline، Tigecycline، Ciprofloxacin، Levofloxacin، Imipenem، Trimethoprim-sulfamethoxazole،Sulfonamides) فقد كانت نسب مقاومة هذه المضادات كالأتي ( 96%، 94%، 88%، 92%، 68%، 26%، 56%، 52%، 60%، 0%، 26%، 28%، 14%، 74%، 68%) على التوالي. حدد التركيز المثبط الادنى MIC لمضاد Polymxen B اذ تراوحت القيم للمضادات مابين 2 – 4 .وكانت عدد العزلات المقاومة بلغت 24 عزلة وبنسبة 48%. لذلك اوضحت النتائج ان المقاومة المتعددة (MDR) كانت بنسبة 96% اما المقاومة المتعددة (XDR) كانت بنسبة 20%.
وتنقسم coli E. إلى 8 مجموعات تطورية، وهي A و B1 و B2 و C و D و E و F وUP بناءً على وجود 8 جينات محددة. وقد أظهرت النتائج ان اعلى مجموعة كانت مجموعة E بـ 13 عزلة بنسبة (26%) يليها مجموعة C وكانت 8 عزلة بنسبة (16%) اما مجاميع A, B2, Up كانت 6 عزلة بنسبة (12%) لكل منها. اما مجموعة B1 كانت 5 عزلة وبنسبة (10%) وكانت اقل مجموعة في كل من D, F كانت 3 عزلة بنسبة (6%) لكل منهما.
وقد بينت نتائج الكشف عن الانتكرون ان نسبة العزلات الحاملة للانتكرون من الصنف الأول كانت 66%. اما الصنف الثاني للانتكرون كانت نتائج الكشف عنه بنسبة 18%. بينما كان الصنف الثالث للانتكرون بنسبة 8% . كانت جميع العزلات التابعة للمجموعة B2 حالة للانتكرون بنسبة 100% اذ مثلت اكبر المجاميع التطورية الحاملة للانتكرون الصنف الأول في الدراسة الحالية.
جرى الكشف عن جينات جينات qacEΔ1 و sul1 المقاومة للمضادات المتواجدة في تركيب الانتكرون الصنف الأول وكانت نسبة جين sul1 في العزلات الحاملة للانتكرون فقط 67.64%. وكانت نسبة جين qacEΔ1 85.29%.
وتم الكشف الجزيئي لتركيب الانتكرون الصنف الأول لمناطق تدخل في تركيب الانتكرون وهي ( gene cassette Class I و 5,CS و 3,CS و ORFend و Sul1B و F12R-Orf513-lnk13) واظهرت نتائج الكشف عن المناطق أعلاه جزيئيا وكانت جميعها متواجدة في جميع العزلات.
تم اجراء التحليل التتابعي Sequencing DNA لجينات الانتكرون الصنف الاول و qacEΔ1 وsul1 لاربع عزلات وتم مطابقتها مع العزلات العالمية على موقم NCBI وتحليل الانتكرون وتحديد مواقع جينات qacEΔ1 و sul1 عليه وكانت بنسبة (99.59% و 99 % و 100%) على التوالي.