اعلام المكتبة المركزية / المهندس مهند
المستخلص
تم جمع 300 عينة سريرية من الحروق ،الجروح ،الأنف، الدم والادرار و من مرضى مستشفيات مختلفة في محافظة ديالى خلال الفترة من كانون الأول 2019 إلى نهاية آب 2020. وأظهرت النتائج أن العزلات البكتيرية ظهرت في 270 من هذه العينات. أظهر الكشف باستخدام الطرق الميكروبيولوجية التقليدية بنظام VITEK 2 والكشف الجزيئي باستخدام جين 16S rRNA(164 bp) أن 75 (27.7٪) من العزلات كانت تعود لبكتريا المكورات العنقودية الذهبية تم التحقق من مقاومة وحساسية عزلات بكتريا Staphylococcus aureus ضد مجاميع مختلفة بوساطة طريقة انتشار الاقراص القياسية . بينت النتائج ان هناك زيادة كبيرة p<0.01, p<0.05)) بتاثير معنوي في معدل مقاومة بكتريا S.aureus للمضادات الحيوية المختلفة ، اذ بلغت 100% لمضاد Cefotaxime و 100% لمضاد colistin في حين كان هناك انخفاض في معدل مقاومة البكتريا لمضاد Imipenem وبنسبة 12% . بين اختبار حساسية المضادات الحيوية لعزلات بكتريا Staphylococcus aureus ان 9عزلة (12%) كانت حساسة لمضادات متعددة (MDS) و 24(32%) متعددة المقاومة للمضادات الحيوية (MDR) و 42(56%) شديدة المقاومة للمضادات الحيوية (XDR) ..اشار الكشف عن التاثير التثبيطي لتراكيز مختلفة من ZnONPS ،AgONPS ، TiO2NPS ان قيمة التركيز المثبط الادنى لمادة ZnONPS تراوحت بين ( 1300 – 650) بينما كان (81.25 ميكروغرام/مل) ل AgONPS وقيمة التركيز المثبط الادنى لمادة TiO2NPS (1300–2600 ميكروغرام/مل ) .تم تحديد نشاط النمط المظهري لنظام مضخة التدفق في 15 عزلة والتي كانت مقاومة للمضاد الاريثرومايسين-التتراسايكلين بواسطة طريقة اكار العجلة الدوارة (EtBrCW) واظهرت النتائج ان 100% من العزلات كانت ايجابية لهذه الطريقة . تم الكشف عن جينات الاريثروميسين (ermA، ermB، ermC) بواسطة تقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل للعزلات. أظهرت النتائج أن 5 (33.3%) ،5 (%33.3) ، 15 ( (100%كانت موجبة لجين ermA ، ermB ، ermC على التوالي ، وأظهرت النتائج أن 15 ( (100%،5 (%33.3) ،8(%53.33) لديهم جينات tetK، tetL، tetM. فيما يتعلق بانتشار جينات مضخة التدفق أظهر أن15 (15 (100%((%100 ، (100%) 14 من العزلات كانت تمتللك medA و tet38 و lmrS على التوالي. تم انتخاب سلالتين من سلالات بكتريا S.aureus المقاومة للاريثرومايسين- التتراسايكلين ذات المصادر البشرية في مدينة بعقوبة /ديالى وكان لكل تسلسل رمز شفرة وهي (Za-staph 12, Za-staph 14) قدمت إلى بنك الجينات العام . تم نشر هذه السلالة في المركز الوطني لمعلومات التكنلوجيا الحيوية في حين تم تسجيل قاعدة بيانات السلالة في بنك بيانات الحمض النووي في اليابان وبنك الجينات لتسلسل الحمض النووي مع رقم تسلسلل اربعة جينات مقاومة للمضادات. تم قبول كل هذه التسلسلات في بنك الجينات .نجحت الدراسة الحالية في الاعتماد على كلتا العزلتين [SA12 and SA14 ] لتكون مؤشرات قياسية كنوع من السيطرة الإيجابية مثل العزلات المرجعية لمقارنة نتائج التعبير الجيني لجينات medA, tet38, ermC, tetM لعزلات أخرى بناءً على هذين العزلتين . تم التحري عن التعبير الجيني لأربعة جينات لمضخات التدفق (medA و tet38 و ermC و tetM) مع جين مرجعي (16SrRNA) ، تم تصميم اختبار qRT- PCR بخطوة واحدة لاكتشاف الجين وتوصيفه. أما عن نتائج التنميط الجيني بتقنية BOX –PCR والتي تم تصنيفها أيضًا إلى مجموعتين رئيسيتين: المجموعة A والمجموعة B تحتوي المجموعة A على مجموعتين (A1 و A2). يحتوي A1 على عزلة واحدة ، بينما يحتوي A2 على مجموعتين (A2–1) و (A2–2). المجموعة الأولى تحتوي على عزلتين بينما المجموعة الثانية تحتوي على ثلاث عزلات بينما المجموعة B تحتوي على ثمانية عزلات. في هذا الجزء تم دراسة التاثير التثبيطي لثلاثة مواد نانوية هي (AgONPS ,ZnONPS ,TiO2NPS) ضد بكتريا المكورات العنقودية الذهبية بطريقة التخفيف التسلسلي حيث كانت مادة AgNPS هي الاكثر تثبيطا ثم تلتها مادة ZnONPS بينما أدت TiO2NPs إلى زيادة التعبير عن جميع العزلات ، وكان متوسط MIC sub ( 40.62ميكروكرام /مل) (325 ميكروكرام/مل) (650 ميكروكرام/مل) على التوالي . اظهر تعبير جين (medA) ان اعلى مستوى من folding بمعدل يبلغ 0.25 وجد في حالة العزلات المعاملة بمادة AgONPS عند تركيز 40.62ميكروكرام/مل والذي ادى الى تقليل في معدل التعبير الجيني لجين medA وفقًا لـ p≥0.01 أدت المعاملة باستخدام جزيئات ZnONPS النانوية إلى انخفاض في قيمة التعبير الجيني في أربعة عزلات لجين (medA) والتي كانت تقريبا (0.32) وبتركيز (325 ميكروكرام/مل) والتغيير من 0.08 to 0.61 ضعفًا في التعبير الجيني medA)) كان بسبب التعرض الفعال لمادة ZnONPS وبتركيز (325 ميكروكرام/مل) والتي اثرت وبشدة على التعبير الجيني لجين medA. ومن جانب اخر جميع العزلات كانت ذات تعبير جيني عالي عند معاملتها بمادة TiO2NPS واظهرت قيم Sub MIC ان التغير في قيمة fold كانت بحدود 12.20 حيث توجد فروق معنوية بين عزلة الحروق وعزلة الادرار قبل وبعد المعاملة بمادة TiO2NPS في حين لاتوجد فروق معنوية في عزلة الدم وعزلة الجروح اظهر التعبيرالجيني tet38 أقل مستوى من folding بمعدل 0.54 وجد في حالة العزلات المعاملة بـمادة AgONPS بتركيز 40.62ميكروغرام / مل ، كما كان هناك انخفاض في folding. لا توجد فروق ذات دلالة إحصائية في العزلات المعاملة بمادة AgONPS قبل وبعد المعاملة . أظهر التعبير الجيني عن tet38 أنه معدل مستوى folding يكون 0.97 في حالة العزلات التي التي تمت معاملتها بـ ZnONPS بتركيز 325 ميكروغرام / مل وأدى إلى انخفاض في التعبير الجيني لـ tet ، وكان sub-MIC لـ ZnONPS nanoparticles ذو فعالية واطئة على التعبير على كل من جينات tet38 و 16SrRNA في العزلات المستهدفة المختارة في حين لم تظهر فروق معنوي عند p ≥0.01 بين العزلات المستهدفة .ZnONPS أظهر التعبير عن tet38 أنه تم الحصول على أعلى مستوى من التعبير بمتوسط 10.95 في حالة العزلات التي عولجت بـ TiO2NPS بتركيز 650 ميكروغرام / مل مع قيمة folding بين 2.12 – 20.18أ وظهرت عزلة واحدة (SA12) زيادة في التعبير عن tet38 مع تغييرfolding بنسبة20.18 . أدت المعالجة بـ TiO2NPS إلى زيادة قيمة التعبير الجيني في جميع العزلات الاربعة لـ tet38 بمتوسط 10.95 بتركيز 650 ميكروغرام / مل. أظهر التعبير عن ermC أقل مستوى من folding بمتوسط 0.55 في حالة العزلات التي عولجت بـ AgNPS بتركيز 40.62 ميكروغرام / مل ، كما كان هناك انخفاض فيfolding ، ولا توجد فروق معنوية في ثلاث عزلات SA12 ، SA14 ، في حين أن SA13 لها فروق ذات دلالة إحصائية في AgONPS قبل العلاج وبعده. أظهر تعبير ermC أن مستوى folding بمتوسط 0.66 وجد في حالة العزلات التي عولجت بـ ZnONPS بتركيز 325 ميكروغرام / مل وأدى إلى انخفاض في التعبير الجيني لـ ermC. أظهر التعبير عن ermC أن أعلى مستوى من folding بمتوسط 41.47 وكانت هذه القيمة تعتبر الأعلى بين جميع المعاملات مع الجسيمات النانوية وجدت في حالة العزلات التي عولجت بـ TiO2NPS بتركيز 650 ميكروغرام / مل. لزيادة قيمة التعبير الجيني في جميع العزلات الاربع من ermC بمتوسط 41.47 بتركيز 650 ميكروجرام / مل أخيرًا ، أظهر التعبير عن tetM أقل مستوى منfolding بمتوسط 0.25 في حالة العزلات التي عولجت بـ AgNPS بتركيز 40.62 ميكروغرام / مل ، كما كان هناك انخفاض فيfolding ، ولا توجد فروق معنوية في جميع العزلات. أظهر التعبير عن tetM أن مستوى folding بمتوسط 0.18 وجد في حالة العزلات التي عولجت بـ ZnONPS بتركيز 325 ميكروغرام / مل وأدى إلى انخفاض في التعبير الجيني لـ tetM ، وهناك فروق ذات دلالة إحصائية لجميع العزلات. بعد وقبل استخدام .ZnONPS
