Blog

المستخلص

 أُجريت الدراسة الحالية على عينة من المرضى العراقيين المصابين بألتهاب المفاصل الروماتويدي والسالمونيلا التايفية المراجعين للعيادات الاستشارية لأمراض المفاصل في مستشفى بغداد التعليمي لمدينة الطب في محافظة بغداد وجميع محافظات العراق الذين يراجعون العيادة الاستشارية  للفترة ما بين كانون الاول / 2020 شباط/ 2021 ، أذ جمعت عينات الدم من 60 مريض مصاب بالتهاب المفاصل الروماتويدي ومصابين ببكتريا السالمونيلا التايفية بأعمار تراوحت بين 21-70 سنة   كان عدد الأناث أكثر من عدد الذكور وبفارق معنوي . ولغرض المقارنة فقد جمعت 28 عينة دم أخرى من الأشخاص السليمين (سيطرة أصحاء) تراوحت بين 21-60 سنة وكان عدد الذكور منهم 5 وبنسبة 17.9% وعدد الاناث 23 وبنسبة 82.1%، إذ أشارت النتائج أن أعلى نسبة إصابة في الفئة العمرية 41-60 سنة وبنسية 51.7%  وأن أقل نسبة إصابة ضمن الفئة العمرية (≤20) سنة (3.3%)، وقد أشارت النتائج الى وجود فرق معنوي إحصائيا (P<0.01) بين نسبة الإصابة بالمرض لدى المتزوجين وكانت الاكبر مقارنة بنسبة الإصابة لدى غير المتزوجين (80.0%) ،(20.0%) على التوالي.  أشارت النتائج الى عدم وجود فرق معنوي بين معدل كتلة الجسم (BMI) Body Mass Index بين مجاميع الدراسة. كانت نسبة الإصابة بالمرض لدى غير المدخنين وهي الاكبر مقارنة بنسبة الإصابة لدى المدخنين (90.0%)، (10.0%) على التوالي مع وجود فرق معنوي (P<0.001). كانت نسبة المرضى الذين خضعوا للعلاج البايلوجي (50.0%) وهي النسبة الاعلى بينما شكلت نسبة المرضى الذين خضعوا للعلاج الكيمياوي (15.0%)  وهي النسبة الأقل أما نسبة المرضى الذين خضعوا للعلاج المختلط ( 35.0% ) بفروق معنوية عالية جدا (p<0.001 ). تبين أن هناك فروقات عالية المعنوية (p<0.001) في مدة الإصابة بالمرض، إذ بلغت نسبة (16) مريض مدة أصابتهم بالمرض (1-5) سنوات 26.7%  وبلغت أعلى نسبة لـ (23) مريض مدة أصابتهم بالمرض (6-10) سنوات 38.3% ،وبلغت أقل نسبة لـ (5) مرضى مدة أصابتهم بالمرض (11-15) سنة 8.3% وبلغت نسبة (8) مرضى مدة أصابتهم بالمرض (16-20) سنة (13.3%) وبلغت نفس النسبة لنفس العدد للمرضى الذين تجاوزت فترت أصابتهم( 20 ) سنة. أشارت النتائج الى وجود فروق عالية المعنوية بين مستويات التعليم لدى المرضى إذ كانت أعلى نسبة أصابة في الحاصلين على التعليم الأبتدائي وبنسبة (45%) في حين بلغت أقل نسبة لدى المرضى الحاصلين على التعليم الثانوي والجامعي وبنسبة (11.7 %). دُرس المرض لدى المرضى المصابين بفايروس كوفيد 19 والغير مصابين به إذ بينت النتائج أن عدد المصابين بالفايروس كان (13) وبنسبة (21.7%) في حين كان عدد الغير مصابين به (47) وبنسبة (78.3%) وبفرق عالي المعنوية p<0.001.

        تشير النتائج إلى عدم وجود فرق معنوي إحصائياً في أعداد خلايا الدم البيضاء والحمراء وتركيز الهيموغلوبين بين (مجموعتي المرضى والأصحاء)، إذ بلغ متوسط أعداد خلايا الدم البيضاء (m/mm³) 8.14 مقارنة بمتوسط بالأصحاء والتي بلغت (m/mm³) 8.22. في حين بلغ متوسط أعداد خلايا الدم الحمراء(m/mm³)4.28 للمرضى مقارنة بالأصحاء والتي بلغت (m/mm³) 4.44 أما تركيز الهيموغلوبين لدى المرضى كان (g/dl) 11.94 مقارنة بالأصحاء والتي بلغت (g/dl) 12.70. من ناحية أخرى أشارت النتائج الى وجود فرق معنوي P<0.05 بين أعداد الصفائح الدموية لمجموعة المرضى بمعدل 304.75 بالمقارنة مع معدلها بالأصحاء فكانت 247.75، وقد أشارت النتائج إيضا إلى وجود ارتفاع معنوي (P<0.01) في معدل ترسيب كريات الدم الحمراء لدى المرضى مع السيطرة الاصحاء. إذ بلغ معدل الترسيب 46.10  ملم/ساعة بينما بلغ ـ30.68 ملم/ ساعة في السيطرة الاصحاء .

وقد أشارت النتائج الى حدوث ارتفاع معنوي (P<0.001) في تركيز بروتينcyclic  citrullinated peptides antibody   anti في عينات الدم للمرضى مقارنة بالأصحاء، إذ بلغ متوسط البروتين في الدم للمرضى   406.62 ملغم/لتر مقارنة بـ 66.07 ملغم/لتر في الاصحاء.  وإلى وجود ارتفاع معنوي(P<0.001) في مستوى البين الأبيضاضي 1 الفا في المرضى 2.87     وحدة/مل أما في الاصحاء1.36 وحدة/مل. كما أشارت النتائج الى وجود أرتفاع عالي المعنوية (P<0.001) في تركيز البين الأبيضاضي 33 لعينة المرضى 19.09 ملغم/ديسيلتر أما الاصحاء8.18 ملغم/ ديسيلتر. وقد أشارت النتائج الى وجود أرتفاع معنوي (P<0.001) في معدل البين الأبيضاضي 36 الفا في المرضى والذي بلغ  284.65   ng/l مقارنة بالاصحاء والتي تبلغ 238.59  ng/l. أشارت النتائج الى وجود أرتفاع عالي المعنوية (P<0.001) في معدل الكلوبيولين المناعي IgG في المرضى والذي بلغ 3.39 (ug/ml) مقارنة بالاصحاء والتي تبلغ 0.72 (ug/ml). أشارت النتائج إلى وجود أرتفاع عالي المعنوية (P<0.001) في معدل الكلوبيولين المناعي IgM في المرضى والذي بلغ 8.75 (ug/ml) مقارنة بالاصحاء والتي تبلغ 5.32  (ug/ml) .

أُجري بعدها تضخيم الموضع الدقيق rs1304037 لقطعة التضخيم ذات الطول 337 زوج قاعدي والتي غطت جزء من 3ʹ-UTR من جين البين الأبيضاضي 1الفا داخل الكروموسوم رقم 2 باستخدام بوادئ متخصصة لهذا الموقع وحلل تسلسل الاحماض النووية لهذا الجين. تم اكتشاف استبدال واحد للحمض النووي في نواتج الـ PCR المضخمة، وهي 176T>C أو T176C. تم اكتشاف هذه المتغايرة في ثلاثة أنماط جينية متعددة. في عينات المرضى لوحظ النمط الوراثي متغاير الزيجوت T / C بصورة أكثر انتشاراً من العينات الأخرى التي تم فحصها وبواقع 26 من أصل 60 عينة التي يتبعها على التوالي النمط الوراثي T / T المتماثل الزيجة وبواقع 24 من أصل 60 عينة ومن ثم النمط الوراثي C / C المتماثل الزيجوت وبواقع 10 عينات من أصل 60 عينة. أما في عينات السيطرة فقد لوحظ بأن النمط الوراثي T / T المتماثل الزيجة هو الاكثر انتشارا مقارنة مع العينات الأخرى التي تم فحصها وبواقع 15 من أصل 28 عينة والذي يتبع على التوالي بالنمط الوراثي T / C متغاير الزيجوت وبواقع 10 من أصل 28 عينة ومن ثم النمط C /C المتماثل الزيجوت وبواقع 3 من أصل 28 عينة. فيما يتعلق بالنمط الجيني  rs1304037 (T / G) أشارت النتائج أن مجموعة المرضى تمارس ارتباطًا غير معنوي بتوزيع الانماط الجينية TT و TC و CC القائم على rs1304037 مع التهاب المفاصل الروماتويدي. لم يظهر الأفراد ذوو التركيب الوراثي TC أي خطر ملحوظ للإصابة بالتهاب المفاصل الروماتويدي بين المجموعات المقارنة تضمنت النتائج أن الأفراد الذين يعانون من الأليل C لم يتعرضوا لخطر كبير للإصابة بالتهاب المفاصل الروماتويدي.

 أما جين البين الأبيضاضي 33أجري له تضخيم الموضع الدقيق rs1375  لقطعة التضخيم ذات الطول 421 زوج قاعدي التي تغطي جزئيًا مناطق الانترون الثاني intron-2 من جين البين الأبيضاضي 33 داخل الكروموسوم رقم 9 باستخدام بوادئ متخصصة لهذا الموقع وحلل تسلسل الاحماض النووية لجميع العينات المدروسة. تم اكتشاف استبدال واحد للحمض النووي في نواتج الـ PCR المضخمة ، أي 165G>T أو G165T. تم اكتشاف هذه المتغايرة في ثلاثة أنماط ذات عدة أشكال  G165T. في عينات المرضى ، أشارت النتائج أن  النمط الوراثي  T / T المتماثل الزيجة يوجد بشكل أكبر مقارنة مع العينات الأخرى التي تم فحصها في عينات المرضى وبواقع 28 من أصل 60 عينة في المرضى و 16 من أصل 28 عينة في السيطرة, والتي تبعها على التوالي النمط الوراثي    T / G متغاير الزيجوت وبواقع 27 من أصل 60 في عينات المرضى و 11 من أصل 28 في عينات السيطرة, والنمط الجيني G / G المتماثل الزيجة وبواقع 5 من أصل 60 في عينات المرضى و 11 من أصل 28 في عينات السيطرة. كما أشارت النتائج بأن النمط الوراثي T / T المتماثل الزيجة هو الشكل الأكثر انتشارا ً مقارنة مع العينات الأخرى التي تم فحصها في (وبواقع 28 من أصل 60 عينة في المرضى و16 عينة من أصل 28 عينة في السيطرة). والمتبوعة على التوالي بالنمط الوراثي T / G المتغاير الزيجوت (وبواقع 27 من أصل 60 عينة في المرضى و 11 من أصل 28 عينة في (السيطرة), والنمط الجيني G / G المتماثل الزيجة (وبواقع 5 من أصل 60 عينة في المرضى و 1 من أصل 28 عينة في عينات السيطرة). أشارت النتائج أن مجموعة المرضى قد أبدت ارتباطًا غير معنوي فيما يتعلق بتوزيع الانماط الجينية TT وTG وGG القائم على rs1375 مع التهاب المفاصل الروماتويدي. ولم يظهر الأفراد ذوو التركيب الوراثي TG أي خطر ملحوظ للإصابة بالمرض بين المجموعات المقارنة. أشارت النتائج عدم وجود أي فروق ذات دلالة إحصائية بين الأفراد الحاملين للنمط الوراثي CC في كلتا عينات المرضى والسيطرة. وأن الأفراد الحاملين للأليل G لم يتعرضوا لخطر ملحوظ للإصابة بمرض إلتهاب المفاصل الروماتويدي مقارنة بالأفراد الحاملين للأليل T المرجعي.

أشارت النتائج الى أن جين البين الأبيضاضي 36 الفا أُجري له تضخيم الموضع الدقيق تم تحليل المتغايرة rs2305152 والمتغايرة rs895497 على التوالي لجين البين الأبيضاضي 36 الفا وفق طريقة سانجر لقطعة التضخيم ذات الطول 226 زوج تغطي جزئيًا مناطق القطعة ماقبل الترجمة – الأكسون الأول – الأانترون الأول – الأكسون الثاني (3-UTR-exon 1- intron-1-exon-2) لهذا الجين باستخدام بوادئ متخصصة لهذا الموقع وحلل تسلسل الاحماض النووية لجميع العينات المدروسة. المتغايرة rs2305152 وهي المستهدفة التي تم فيها اكتشاف استبدال الحمض النووي للأدينين بالسيتوسين في الموضع 77 من قطعة الـ PCR المضخمة، وهي 77A>C  أو A77C. تم اكتشاف هذه المتغايرة في ثلاثة أنماط ذات أشكال عدة. وفي مجموعة المرضى، لوحظ كل من النمط الجيني A / A المتماثل الزيجة والنمط الجيني A / C المتغاير الزيجة بشكل متساوٍ في انتشارها مقارنة بالعينات الأخرى التي تم فحصها وبواقع 29 من أصل 60 عينة ولكل منهما, متبوعتين بالنمط الجيني C / C متماثل الزيجوت وبواقع 2 من مجموع 60 عينة. وفي مجموعة السيطرة، تم العثور على الشكل السائد في النمط الجيني متماثل الزيجوت A / A وبواقع 14 من مجموع 28 عينة. وبعد هذا النمط, يأتي النمط الجيني متغاير الزيجوت A / C (بواقع 9 من مجموع 28 عينة), ثم النمط الجيني C / C متماثل الزيجوت (بواقع 5 من مجموع 28 عينة) على التوالي. أشارت النتائج أن في المتغايرة الثانية التي تم اكتشافها ، تم فيها استبدال الحمض نووي ادنين إلى كوانين في الموضع 189 بتردد عالٍ ، أي 189A>G أو A189G. تم اكتشاف هذه المتغايرة في ثلاثة أنماط متعددة. في مجموعة المرضى، لوحظ النوع A / A المتماثل الزيجة بتردد منخفض للغاية في كلتا الحالتين, في عينات المرضى (بواقع 2 من أصل 60 عينة) وعينات السيطرة (بواقع عينة واحدة من أصل 28 عينة). بينت النتائج على العثور على النمط الجيني G / G المتماثل الزيجة في أعلى نسبة في كلا المجموعتين (بواقع 41 من أصل 60 و20 من أصل 28 في المرضى والسيطرة على التوالي). بينما وجد التركيب الوراثي A / G متغاير الزيجوت بنسبة وسيطة مقارنة بالنوعين الآخرين (بواقع 17 من أصل 60 و7 من أصل 28 على التوالي). وجد أن المتغايرتين A77C و A189G المكتشفتين تُعرفان باسم rs2305152 و rs895497 على التوالي. بينت النتائج أن المتغايرة rs2305152  المستهدفة قد وقعت في تسلسلات الانترون، بينما وجدت المتغايرة  rs895497  الغير مستهدفة في منطقة التشفير لجين البين الأبيضاضي 36 الفا. تسبب المتغايرة rs895497  تغييراً في تسلسل الاحماض الأمينية للبروتين البين الأبيضاضي 36 ألفا (طفرة الـ missense) بسبب استبدال الحامض الأميني Isoleucine مع Alanine في الموضع 36 من طول البروتين الكامل (p.36Ile>Ala). فيما يتعلق بالمتغايرةrs2305152 ، لوحظ أن مجموعة المرضى قد أبدت ارتباطًا غير معنوي لتوزيع النمط الجيني AC القائم على rs2305152 مع التهاب المفاصل الروماتويدي. لم يظهر الأفراد ذوو التركيب الوراثي AC أي خطر معنوي للإصابة بالتهاب المفاصل الروماتويدي بين المجموعات المقارنة. أشارت النتائج الى وجود فرق معنوي بين الأفراد ذوي التركيب الوراثي CC بين عينات المرضى والسيطرة. أوضحت النتائج أن الأفراد الذين لديهم النمط الوراثي CC أظهروا قدرة وقائية كبيرة ضد تطور التهاب المفاصل الروماتويدي مقارنة بالأفراد ذوي الأنماط الجينية الأخرى.

فيما يتعلق بالمتغايرةrs895497 ، لوحظ أن مجموعة المرضى قد أبدت ارتباطًا غير معنوي لتوزيع النمط الجيني AG القائم على rs2305152 مع مرض إلتهاب المفاصل الروماتويدي. لم يظهر الأفراد ذوو التركيب الوراثي AG أي خطر ملحوظ للإصابة بالتهاب المفاصل الروماتويدي بين المجموعات المقارنة. لم تشير النتائج أي فرق معنوي بين الأفراد الحاملين للنمط الوراثي CC في المرضى والسيطرة كما أشارت النتائج الى أنه لم يظهر الأليل G فروقًا ذات دلالة إحصائية في التوزيع بين المرضى والسيطرة.

        أشارت نتائج الدراسة الحالية الى وجود اختلافات ملحوظة في توزيع النمط الجيني rs2305152: CC بين عينات السيطرة وعينات المرضى. أظهر التركيب الجيني rs2305152: CC انخفاضًا ملحوظًا في نسبته من عينات السيطرة (17.9٪) إلى عينات المرضى (3.4٪). أظهرت الحسابات الإحصائية التي تم إجراؤها الى وجود ارتباطاً معنوياً بين هذا النمط الوراثي والتهاب المفاصل الروماتويدي للعينات والمصابين بالسالمونيلا التايفية (P = 0.0348). أظهرت التحليلات الإحصائية لهذه الدراسة بوضوح أن الأفراد الحاملين للنمط الجيني rs2305152: CC أظهروا تأثيرًا وقائيًا ضد تطور التهاب المفاصل الروماتويدي حيث أن OR الخاصة بهم قد أشارت إلى قيم منخفضة بشكل ملحوظ من حيث تطور مرض المناعة الذاتية هذا (0.1586 = P). و لم ينعكس هذا النوع من الارتباط في الأليل C نفسه من حيث ارتباطه بالتهاب المفاصل الروماتويدي (P = 0.3847). أشارت النتائج إلى الطابع المتنحي للأليل C لذلك لا يمكن لهذا الأليل أن يظهر أي تأثير مظهري بمفرده ويتطلب أليلًا متماثلًا آخر لممارسة مثل هذا التأثير الوقائي, أشارت نتائج الدراسة الحالية المثيرة للاهتمام بين التركيب الوراثي CC لهذه المتغايرة والتهاب المفاصل الروماتويدي علاقة معنوية على الرغم من انخفاض عدد عينات الدراسة الذين تم فحصهم. وهذا يعني أن اضافة عدد أكبر من عينات الدراسة يمكن أن يخرج بمزيد من البيانات الإيجابية في هذا الصدد. وبينت النتائج أنه لم يتم نشر أي دراسات سابقة في قاعدة بيانات PubMed لوصف وجود أي ارتباط بين هذه المتغايرة وتطور أي اختلالات خلوية ملحوظة. فضلاً عن ذلك، لم يتم أكتشاف هذه المتغايرة في قاعدة بيانات ClinVar، نظرًا لعدم وجود أي دراسة سابقة في هذا الصدد، فإن نتيجة الدراسة الحالية هي الأولى التي أبلغت عن وجود ارتباط كبير بين تعدد اشكال المتغايرة rs2305152 وإلتهاب المفاصل الروماتويدي. والدراسة الاولى التي درست عن المرضى المصابين بألتهاب المفاصل الروماتويدي والمصابين بالسالمونيلا التايفية .