You are currently viewing رسالة ماجستير لمياء خالد / بعنوان : الكشف المظهري والجزيئي لتكوين الأغشية الحيوية في المكورات العنقودية الذهبيةStaphylococcus aureus المعزولة سريرياً

رسالة ماجستير لمياء خالد / بعنوان : الكشف المظهري والجزيئي لتكوين الأغشية الحيوية في المكورات العنقودية الذهبيةStaphylococcus aureus المعزولة سريرياً

المستخلص

جمعت (190) عينة سريرية من مصادر مختلفة (مسحات جروح وحروق و ادرار ومسحات أذن ودم) لمرضى مصابين بالتهابات مختلفة، من مستشفى بعقوبة التعليمي، والعيادة الاستشارية، ومستشفى ‏البتول التعليمي في محافظة ديالى للمدة من 15 أيلول 2022 إلى 15 كانون الاول 2022. تم التشخيص الأولي للعزلات باستخدام وسطي أكار الدم، و اكار المانيتول الملحي كوسط ‏انتقائي. زُرعَت العينات على الأوساط الزرعية المناسبة بطريقة التخطيط وتبعاً للفحوصات المظهرية و الكيموحيوية، فضلاً عن الاختبارات الجزيئية للتأكد من نقاوتها وتشخيصها، إذ أظهرت الدراسة أن المستعمرات التي تعود لعزلات بكتريا‏ المكورات العنقودية الذهبية ‏Staphylococcus aureus المخمرة ‏للمانيتول بدت صفراء اللون محاطة بهالة صفراء، إضافة لذلك بدت خلايا البكتريا تحت المجهر كروية الشكل متجمعة على شكل عناقيد العنب بعد ‏تصبغها بصبغة كرام، وكذلك تخميرها لسكر المانيتول ‏والنتيجة الموجبة لاختبار الكتاليز و النتيجة السالبة لاختبار الأوكسديز. تم تشخيص وعزل 50 (26%) ‏عزلة من المكورات العنقودية الذهبية. شُخصت العزلات جزيئياً باستخدام الجين 16S rRNA من جميع مصادر العزل، و كانت جميع هذه العزلات حاملة للجين.

     تم التحري عن الحساسية للمضادات الحيوية لجميع عزلات‏ المكورات العنقودية الذهبية؛ وذلك باستخدام طريقة انتشار الأقراص. أظهرت العزلات قيد الاختبار مقاومة عالية بلغت  ‏‎100‎‏% ‏لمضاد Oxacillin (OX)، فيما تراوحت نسب المقاومة لمضادات Chloramphenicol (C)، Nitrofurantoin ((F، Azithromycin ((AZM، (VA) Vancomycin، Clindamycin (DA)، Trimethoprime- sulfamethoxazdle ((TME، Gentamicin (CN)، RA) Rifampin)، Doxycycline (DOX)، Ceftaroline (FEP)، و Teicoplanin ،(TEC) 16%، 4%، 92%، 4%، 60%، 72%، 44%، 48%، 44%، 80%، 42% على التوالي. كما تم اجراء التحليل الشجيري Dendogram لحساسية البكتريا للمضادات الحيوية، وتم التحري عن قدرة عزلات المكورات العنقودية الذهبية‏ على انتاج مختلف عوامل الضراوة ‏وهي: الهيمولايسين ‏Hemolysin‏، و الغشاء الحيوي ‏biofilm‏، و الانزيم المخثر ‏Coagulase‏. كانت جميع العزلات تحت الدراسة منتجة لانزيم المخثر ،Coagulase وأظهرت تحلل دم من نوع بيتا β-hemolysin، كما أظهرت النتائج أنّ 29 (58٪) من العزلات منتجة للغشاء الحيوي على وسط أحمر الكونكو، بينما كانت جميع العزلات وبنسبة 100% منتجة للغشاء الحيوي باستخدام أطباق المعايرة الدقيقة. تم فحص قابلية المكورات العنقودية الذهبية لخمس عزلات من مصادر مختلفة (عزلة واحدة من كل مصدر) على تكوين الغشاء الحيوي على مكونات الدم (كريات الدم الحمراء و البلازما المفصولة)، وأظهرت النتائج أنّ جميع العزلات كانت منتجة للغشاء الحيوي، وبنسبة 100%، ولفصائل الدم المختلفة، فكانت فصيلة الدم O هي الأعلى في الانتاجية، تليها فصيلة A وB بينما كانت فصيلة الدم AB هي الأضعف في الانتاجية.

      تم اختيار 24 عزلة من بكتريا المكورات العنقودية الذهبية S. aureus المرضية التي أَظهرت مقاومة متعددة للمضادات بطريقة الأقراص في الكشف الوراثي عن وجود الجينات ومنها جينات الالتصاق adhesin intracellular الموجودة بضمن المشغل الحيوي (الاوبرون) icaABCD  باستخدام تقنية تفاعل البلمرة التسلسل PCR. بينت نتائج الكشف أنّ 20 من أصل 24 عزلة تحت الدراسة وبنسبة 83% كانت حاملة لجينات ‏icaA‏ و ‏icaB‏، ‏و إنّ نسبة وجود جين icaC في العزلات كانت 17 (70%)، و نسبة وجود جين icaD في العزلات تحت الدراسة كانت 19 (79%). كما اظهرت النتائج وجود خمسة انماط وراثية لجينات تكوين الغشاء الحيوي. أُجري التحليل التتابعيDNA Sequencing للجين16SrRNA  لعدد من العزلات؛ واظهرت النتائج وجود عدد من الطفرات النقطية و تم تسجيل العزلتين 2 و 26 لتسلسل جين 16SrRNA في موقع NCBI أودعت بالرقم OR512167.1 و OR512168.1 على التوالي.

اترك تعليقاً